I due fratelli lavorano nelle fogne di New York, che sono infestate da animali, come Tartarughe e Granchi. Il protagonista del gioco venne chiamato Jumpman, dopo aver avuto altri nomi temporanei come Mr. Video e Ossan (il termine Giapponese per indicare un uomo di mezza età). Questi rovinano il panorama del Regno dei Funghi, perciò Mario si trova a doverli demolire. Mario, Luigi e la Principessa Peach vengono invitati a trascorrere una vacanza rilasssante sull'Isola Guanciale in Mario & Luigi: Dream Team Bros.. Arrivati lì, vengono accolti da una festa di benvenuto e incontrano anche Dorastella ma, durante la visita a Castel Guanciale, a causa di un incidente, Mario e Luigi si ritrovano costretti a doversi addentrare nelle profondità inesplorate del maniero per salvare la principessa. Successivamente, scopre che l'autore del disastro è Mario Ombra, il quale riesce anche a rapire Peach e portarla con se fino a Girasolandia. Tuttavia, gli Incrociati ne approfittano ed entrano con lui nella Reggia delle Tenebre. In Mario's Bomb Away, Mario deve consegnare delle bombe alle sue truppe, facendo attenzione alle trappole sul suo cammino che potrebbero farle esplodere. Mario, preoccupato, corre a vedere cosa stesse succedendo ma, approfittando della sua assenza, Bowser Junior rapisce la principessa e scappa con lei. Riuscendo, infine, a sconfiggerlo e salvare Pauline. Mario è questi sempre associato al colore rosso, a cui, in alcuni casi, si aggiungono il blu e il bianco. L'obbiettivo è, in maniera simile a Tetris, fare in modo che i nemici non formino una pila che raggiunga il lato superiore dello schermo. Lui, insieme all'Infermiera Peach, lavora nell'Ospedale del Regno dei Funghi dove, usando varie vitamine, distrugge i Virus. (Benvenuta! Il colpo fa cadere la Bob-omba che il Re dei Koopa stava per lanciare ai due, generando un'esplosione che li coinvolge tutti. Riconoscendo il francobollo con cui era stato spedito, l'idraulico capisce che il messaggio è stato mandato dall'Isola Prisma. Perciò, dopo che Dr. Mario ha sconfitto Wario, i due seguono lo scienziato e scoprono che è al sevizio di Rudy il Clown a cui servono le medicine per curare il raffreddore. In Mario Power Tennis, Mario e Luigi sono gli unici personaggi con statistiche equilibrate, anche se, diversamente dal solito, tra di essi ci sono alcune piccole differenze. Mario e il suo inseparabile fratello, Luigi. Benvenuta, nuova galassia!) Nei videogiochi, invece, dove Mario è descritto come un personaggio silenzioso, oltre che più educato, l'idraulico si comporta come se niente fosse. Questo design è stato mantenuto anche per Mario Bros.. A partire da Super Mario Bros. è stato descritto come un uomo di 26 anni (nonostante inizialmente lo si avesse pensato come uomo di mezza età) di bassa statura, alto 1 m e 55 cm, con i capelli castani, i baffi neri-castano scuro, gli occhi azzurri e il cappello con la sua iniziale cucita sopra. In questo gioco Bowser rapisce di nuovo Peach che stavolta ha intenzione di sposare, Mario allora sale sull'aeronave di Bowser per combatterlo ma viene sconfitto e scaraventato nel Regno del Cappello.

Mario appare nel libro da colorare virtuale: Super Mario Bros. & Friends: When I Grow Up. Durante il suo viaggio, Mario riceve un messaggio telepatico di Astrobaffo, il quale chiede il suo aiuto. Dopodiché, vengono portati a Emoziolandia, la nuova base del nemico, ed imprigionati senza possibilità di fuga. Con se la principessa ha una lettera bianca che si rivela essere un Toad privo di colore. Qui è sia un personaggio giocabile che un rivale. Immprovvisamente, poi, appaiono anche Bowser ed un Boo, e, nonostante sembrino intenzionati anche loro a portare guai, rivelano avere solo intenzione di prendere parte amichevolmente al torneo di tennis. In due occasioni riescono anche a salire sul Veliero volante, dove affrontano e sconfiggono Bowser Jr. che però, in entrambe le occasioni, riesce a farli cadere dalla nave, costringendoli a continuare l'inseguimento. Dopo essere stato raggiunto da Mario, fa cadere il ponte che la univa alla torre, intrappolandolo con lui su questa Power Platform.

Fin da subito la caratteristica del personaggio è stata la sua abilità di salto e, da Super Mario Bros. in poi, l'utilizzo di essa per sconfiggere i suoi nemici pestandoli e la sua capacità di ottenere nuovi poteri grazie a dei potenziamenti. Quando nel corso dell'avventura Mario si iscrive al torneo di Oolong, viene soprannominato per tutta la sua durata "Great Gonzales" da Ganz.

Mario e Luigi, anche nelle loro forme potenziate (come Mario Fuoco o Mario Procione), possono essere impostati come capitani del gruppo di personaggi che si vuole usare in battaglia. Possono guidare tre veicoli: Kattobi, Yonque, o Monster.

La sua mossa speciale in tutti gli sport è un esplosione di fuoco così potente da spingere all'indietro anche gli avversari che cercano di resistergli per non fargli fare punto. li fermano e attivano la Bomba Subspaziale che il ministro stava trasportando. Dopo molto tempo, Mario torna a prendere parte in un avventura platform 2D. Mario e Luigi devono riuscire a salvarli, sconfiggendo i Bowserotti che ne hanno trasformato i re in animali. Baby Mario, invece, cade sull'Isola Uovo, dovedegli altri Yoshi lo trovano e, come nel gioco precedente, decidono di organizzarsi in una sorta di staffetta per aiutarlo a ritrovare suo fratello. Insieme decidono di usare il potere delle Superfoglie per raccogliere delle monete in cielo ma, approfittando della loro assenza, i Bowserotti rapiscono nuovamente la Principessa Peach.

Gareggia contro gli altri personaggi per raggiungere il podio e, diversamente dal solito, tra questi non ci sono differenze di statistiche. Al suo risveglio, però, Mario scopre che Sogghigno ha salvato Ghignarda facendo entrare il suo spirito nel corpo di Bowser e che questo Ghigno Bowser ha rapito la Principessa Peach mentre lui stava male. Durante l'avventura, Mario si scontra più volte con il Re dei Koopa, arrivando ad uno scontro finale tra le nuvole, in cui riesce a sconfiggere definitivamente Bowser, salvando così Peach. Inifine, nei livelli "segreti", Mario deve arrivare al Sole Custode senza usare lo SPLAC 3000 e, di conseguenza, limitato a dover usare solo le sue abilità di salto e schianto a terra. In compenso, è il personaggio con la potenza maggiore tra quelli non appartenenti alla categoria dei giocatori potenti.

In ogni gioco della serie è presente un "Circuito di Mario" ("Pista di Mario" in Mario Kart 64). Scoprono anche che Bowser era stato usato da Sogghigno per liberarsi dei due idraulici e della principessa, perciò, approfittando del desiderio del Re dei Koopa di vendicarsi, lo aiutano a proseguire nel suo cammino dall'interno del suo corpo. Resosi conto di ciò, Mario inizia ad inseguirlo con un martello. Alla fine di Super Mario World 2: Yoshi's Island, si vedono quelli che sembrano essere i genitori di Mario e Luigi, i quali, però, sono coperti dall'ombra e non vengono mai visti in faccia. Occasionalmente, i due si sono alleati per fronteggiare un male più grande, come in Super Mario RPG: Legend of the Seven Stars, Mario & Luigi: Superstar Saga e Super Paper Mario e, mentre Bowser dichiara apertamente di odiare Mario e il suo rapporto con Peach, l'idraulico non ha mai detto di provare lo stesso nei suoi confronti e, anzi, si è dimostrato più volte contento di perdonarlo dopo averlo sconfitto, come in Mario Party DS.

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